PML-RARA, Hibridação in situ, medula óssea

Orientações do cliente

• Este exame é realizado em material de medula óssea.
• A coleta do material pode ser realizada no laboratório, mediante agendamento prévio.
• Amostras colhidas fora do laboratório devem ser mantidas sob refrigeração e entregues até 24 horas após a coleta.

Orientações necessárias

• Este exame é realizado em material de medula óssea.
• A coleta do material pode ser realizada no Fleury, mediante agendamento prévio.
• Amostras colhidas fora do Fleury devem ser mantidas sob refrigeração e entregues até 24 horas após a coleta.

Processamento e adequação da amostra

• Encaminhar a amostra sob refrigeração, o mais rápido possível, ao setor, com questionário preenchido e cópia da receita médica.

Estabilidade da amostra:

Temperatura ambiente: não aceitável;

Refrigerada (2-8 ºC): 24 horas;

Congelada (-20 ºC): não aceitável.

Método

• Trata-se de reação na qual se usa sonda molecular (sequência de DNA) marcada com fluorocromo que vai se ligar ao DNA alvo complementar.

A técnica de hibridação "in situ" por fluorescência é de elevada especificidade e sensibilidade, permitindo visualizar fragmentos de DNA mediante sua marcação e posterior análise ao microscópio de fluorescência

São analisadas 200 intérfases por dois ou mais analistas.

Valor de referência

Controle normal < 4% de células com duas fusões de PML/RARA e um sinal extra separado de PML e RARA.

Interpretação e comentários

• A hibridação in situ por fluorescência (FISH) é particularmente útil na investigação de leucemias promielocíticas agudas (LPA ou LMA-M3) porque detecta a fusão do gene PML com o gene do receptor do ácido retinóico (RARA), a qual forma o gene quimérico PML-RARA. Esse rearranjo gênico ocorre em aproximadamente 90% dos casos e é o equivalente molecular da translocação entre os cromossomos 15 e 17. O exame é rápido, sensível e específico, podendo ser feito tanto em metáfase quanto em intérfase.