- O cliente precisa retirar, no Fleury, um frasco estéril apropriado para coleta.
- A amostra deve ser colhida em casa, antes do café-da-manhã, após a higiene oral (escovação com creme dental e enxágüe rigoroso com água). Caso o indivíduo utilize prótese removível, a higiene precisa ser feita após sua remoção.
- Para a coleta, é necessário gargarejar com água duas vezes e expectorar o conteúdo no frasco.
- Deve-se evitar a coleta de saliva, pois este não é um material adequado para o diagnóstico.
- A amostra deve ser entregue até 22 horas após a coleta, se mantida à temperatura ambiente, ou em 24 horas, caso permaneça sob refrigeração (2-8 ºC).
Não há necessidade de agendamento, porém existe possibilidade de espera para a coleta, caso a sala apropriada para este procedimento esteja sendo utilizada.

- Enviar material (se o material for saliva entrar em contato com a seção antes de pedir nova amostra) em saco plástico apropriado à Seção de Microbiologia, em temperatura ambiente, independente se houver pedido de outros exames que serão realizados em outros setores do Laboratório.

Estabilidade da amostra:
Temperatura ambiente: 2 horas;
Refrigerado (2 - 8 ºC): 24 horas;
Congelado (-20 °C): não aceitável.

- Exame microscópico direto do material clínico após coloração pelo método de Gram.

- Presença de microrganismos da microbiota habitual do local, habitualmente não patogênicos e em pequena quantidade.

- O diagnóstico etiológico de pneumonia com o método de Gram e cultura é válido quando a amostra clínica apresenta boa qualidade (número adequado de células). É importante salientar que nem todas as pessoas são capazes de conseguir uma amostra de escarro apropriada para exame microbiológico. Se forem considerados os critérios estabelecidos por Murray e Washington como parâmetros para uma amostra adequada de escarro, a presença de número igual ou superior a 25 leucócitos polimorfonucleares e de dez ou menos células epiteliais (aumento de 100 vezes), confere ao método de Gram uma sensibilidade de 31% a 50%. Se, contudo, outros critérios forem levados em conta, como os estabelecidos por autores que consideram uma amostra adequada a que apresenta dez ou mais leucócitos polimorfonucleares para cada célula epitelial (aumento de 100 vezes), a sensibilidade do método de Gram aumenta a níveis de até 80%.
- Apesar de não ser o método de eleição, este exame permite detectar fungos e avaliar a presença de leucócitos e de outros tipos celulares. Por se tratar de metodologia que cora a parede celular, o teste não detecta as bactérias desprovidas dessa estrutura, como a Mycoplasma pneumoniae.
- Na prática, a afinidade aos corantes, a morfologia e o arranjo dos microrganismos visualizados podem sugerir alguns gêneros ou espécies bacterianas:
-- cocos gram-positivos aos pares e agrupados: Staphylococcus;
-- cocos gram-positivos aos pares e em cadeias: Streptococcus viridans ou S. pneumoniae;
-- diplococo gram-negativo: Moraxella catarrhalis ou Neisseria spp (saprófitas);
-- cocobacilos gram-negativos: H. influenzae;
-- bacilos gram-negativos: Enterobacteriaceae (E. coli, Proteus e Klebsiella, entre outras) e não-fermentadores (Pseudomonas e Acinetobacter, entre outros);
-- bacilos gram-positivos: Nocardia spp e Corynebacterium spp.